Test traitements antibiotiques sur l’infection chronique à Chlamydia pneumoniae

Télithromycine Traitement de l’infection chronique à Chlamydia pneumoniae chez la souris C57BL / 6J

Des infections chroniques à Chlamydia pneumoniae ont été associées à l’athérosclérose, mais il manque des connaissances claires sur la manière de traiter ces infections. Nous avons étudié l’effet d’un nouvel antibiotique cétolide, la télithromycine, sur l’infection pulmonaire chronique de C. pneumoniae. Des souris femelles C57BL / 6J soumises à un régime à 0,2% de cholestérol ont été inoculées par voie intranasale avec C. pneumoniae soit deux ou trois fois toutes les quatre semaines. La télithromycine a été administrée aux souris par voie sous-cutanée à 75 mg / kg de poids corporel une fois par jour pendant 5 ou 10 jours, en commençant 3 jours après la dernière inoculation. Des échantillons ont été prélevés 4 et 12 semaines après la dernière inoculation. La présence d’ADN de C. pneumoniae dans le tissu pulmonaire a été démontrée par PCR et la détection de l’accumulation de lipides dans le sinus aortique par coloration Oil-Red-O. C. pneumoniae La positivité de l’ADN et les réactions inflammatoires dans le tissu pulmonaire des souris inoculées deux fois étaient significativement affectées par le traitement après les deux inoculations ou seulement après la deuxième inoculation à 12 semaines. L’accumulation de lipides intimes dans le sinus aortique était également légèrement mais significativement moins abondante chez les souris traitées après les deux inoculations que chez celles traitées seulement après la deuxième inoculation pendant 10 jours (moyennes géométriques, 823 et 4324 μm2, respectivement, P = 0,033 ). Aucune différence entre les témoins infectés non traités et le groupe inoculé trois fois et traité pendant 5 jours n’a été observée. Nous concluons que la télithromycine est efficace pour prévenir le développement d’une infection chronique à C. pneumoniae et l’accumulation de lipides intimaux chez les souris C56BL / 6J lorsque le traitement est administré après chaque inoculation.

Chlamydia pneumoniae est une bactérie intracellulaire obligatoire qui provoque des infections des voies respiratoires supérieures et inférieures. Semblable aux autres espèces de Chlamydia, il a tendance à provoquer des infections persistantes. Une infection persistante à C. pneumoniae a été associée à plusieurs maladies chroniques, telles que l’asthme, la maladie pulmonaire obstructive chronique  et la maladie coronarienne (CHD) , dans plusieurs études. C. pneumoniae est sensible aux macrolides et aux tétracyclines, qui sont couramment utilisés pour le traitement des infections aiguës à Chlamydia. Les fluoroquinolones, la rifampicine et, plus récemment, les cétolides se sont également révélés efficaces. À l’heure actuelle, la connaissance des thérapies réussies pour le traitement des infections latentes et persistantes est limitée. La définition et le développement de traitements appropriés efficaces et de moyens d’éradication de l’infection chronique par C. pneumoniae seraient cependant très importants, surtout si ces traitements s’avéraient avoir un effet sur le développement des maladies chroniques associées.

Des modèles animaux antérieurs ont montré que des inoculations répétées de Chlamydia augmentaient la présence et la persistance de l’ADN de Chlamydia dans plusieurs tissus de souris . Chlamydia. pneumoniae provoque également des modifications athéroscléreuses chez les lapins et les souris hyperlipidémiques, bien que des résultats controversés aient été publiés à partir d’études avec des modèles murins. En outre, il a été démontré qu’un traitement précoce des lapins infectés par C. pneumoniae avec des antibiotiques macrolides empêche le développement de l’athérosclérose, tandis que chez les souris déficientes en apolipoprotéine E, l’azithromycine ne diminue pas la progression des lésions lipidiques . Les deux premiers essais de traitement antibiotique à petite échelle avec des patients atteints de coronaropathie ont donné des résultats prometteurs concernant la diminution de l’incidence des événements cardiovasculaires. Dans une étude plus récente, des patients présentant un angor instable aigu ou un infarctus du myocarde sans onde Q ont été traités avec de la clarithromycine pendant 3 mois, ce qui a entraîné une réduction significative des événements cardiovasculaires pendant 555 jours en moyenne. Dans l’étude Azithromycine dans l’artériopathie coronaire: élimination du myocarde avec chlamydia (ACADEMIC), 3 mois de traitement par l’azithromycine chez des patients coronariens stables ont amélioré les marqueurs inflammatoires mais n’ont pas diminué les taux d’anticorps contre C. pneumoniae à 6 mois et n’a pas réduit les événements ischémiques au cours de la période de surveillance de deux ans. Très récemment, deux essais de traitement à l’azithromycine à grande échelle ont montré des résultats négatifs pour l’ensemble de la population: l’essai WIZARD comprenait 7 747 patients ayant déjà eu un infarctus du myocarde et des taux élevés d’anticorps contre C. pneumoniae et l’azithromycine chez les patients. L’étude du syndrome coronarien aigu (AZACS) a inclus 1 439 patients souffrant d’angor instable ou d’infarctus du myocarde (11). Les vastes essais en cours sur les antibiotiques et les patients atteints de coronaropathie peuvent fournir de nouvelles informations sur les effets préventifs possibles des antibiotiques sur les événements cardiovasculaires. D’autre part, d’autres modèles animaux sont nécessaires pour déterminer si les médicaments antimicrobiens peuvent éradiquer l’infection chronique à C. pneumoniae, établir l’effet du traitement antibiotique sur l’athérosclérose et déterminer le médicament optimal ou la combinaison de médicaments ainsi que le dosage et le moment de traitement.

Dans des études antérieures sur des souris, des inoculations multiples de C. pneumoniae ont provoqué seulement des réactions inflammatoires et aucun changement athérosclérotique dans les aortes ou les sinus aortiques de souris C57BL / 6J nourries de nourriture normale. Il a été démontré que les souris de cette souche sont sensibles à l’accumulation de lipides dans l’intima lorsqu’elles sont nourries avec un régime riche en graisses et en cholestérol, et avec ce type de régime, les inoculations de C. pneumoniae augmentent les risques d’athérosclérose. Dans la présente étude, nous avons étudié le développement de l’infection chronique et des réactions inflammatoires chez les souris sans les effets confusionnels possibles d’un régime riche en graisses et des modifications génétiques. Par conséquent, nous avons utilisé des souris C57BL / 6J normales nourries à 0,2% de cholestérol pour étudier les effets d’un antibiotique cétolide, la télithromycine, sur le traitement et l’éradication des infections chroniques à C. pneumoniae et sur le développement de lésions lipidiques dans les sinus aortiques. souris.

Organisme et inoculum.

L’isolat de C. pneumoniae Kajaani 7 (K7), une souche épidémique finlandaise (15) cultivée dans des cellules HL, a été utilisé dans l’étude. Les cellules infectées ont été récoltées avec des billes de verre stériles et perturbées par ultrasonication. Les débris cellulaires ont été séparés par centrifugation à basse vitesse, suivie d’une sonication et de deux cycles de centrifugation à grande vitesse, pour purifier les particules de Chlamydia. Finalement, le culot obtenu a été remis en suspension dans du tampon saccharose-phosphate-acide glutamique pour le stockage. Le nombre d’unités de formation d’inclusion (IFU) d’organismes viables par millilitre a été déterminé par culture dans des cellules HL. Brièvement, les cellules HL ont été infectées avec des dilutions de 10 fois de la culture mère de Chlamydia par centrifugation et incubées à 35 ° C dans 5% de C02 pendant 72 h. Le milieu de culture (RPMI 1640) contenait 7% de sérum fœtal bovin, 1% de l-glutamate, 20 ug de streptomycine par ml et 0,5 ug de cycloheximide par ml. La dose d’inoculum a été estimée sur cette base et la dose infectieuse administrée aux animaux a été confirmée par culture dans des cellules HL, comme décrit ci-dessus.

Modèle animal et traitement.

Des souris C57BL / 6J consanguines femelles de six semaines ont été achetées auprès de M & B A / S, Ry, Danemark. Une alimentation normale (1324, Altromin, Lage, Danemark) avec un supplément de 0,2% de cholestérol a été commencée lorsque les animaux sont arrivés dans les installations. Après 2 semaines d’un régime supplémenté en cholestérol, chaque souris a été inoculée par voie intranasale avec 1,05 x 106 IFU de C. pneumoniae K7 tandis que la souris était sous anesthésie au méthoxyflurane inhalé (Metofane, Schering-Plough, Bloomfield, N.J.). Une ou deux réinfections ont été administrées de la même manière 4 semaines (dose, 1,77 × 106 IFU / souris) et 8 semaines (dose, 2,2 × 106 IFU / souris) après l’inoculation primaire.

La télithromycine a été administrée aux souris par voie sous-cutanée à 75 mg / kg de poids corporel une fois par jour pendant 5 ou 10 jours, en commençant le troisième jour après l’inoculation intranasale. La télithromycine a été dissoute avec de l’acide acétique glacial et ensuite diluée avec une solution saline tamponnée au phosphate (PBS) (concentration finale d’acide acétique, 0,1%). La dose de télithromycine utilisée a été choisie sur la base d’études préliminaires (52), dans lesquelles des doses de 25, 50 et 100 mg / kg pour le traitement de l’infection pulmonaire aiguë à C. pneumoniae ont été testées. Des doses de télithromycine de 50 et 100 mg / kg ont également été utilisées chez d’autres modèles murins (43, 51), et des doses aussi élevées sont apparemment nécessaires chez les souris ayant des taux métaboliques et d’élimination élevés pour obtenir de bonnes réponses thérapeutiques. Auparavant, Bonnefoy et al. (8) a été capable de mesurer les niveaux de télithromycine pendant 8 h après l’administration intraveineuse ou orale de 10 mg de médicament par kg à des souris suisses, et la demi-vie était de 1,2 h par voie intraveineuse.

Les souris ont été divisées en trois groupes de traitement et deux groupes de contrôle de placebo, avec 20 souris dans chaque groupe. Les groupes 1 et 2 ont été inoculés deux fois avec la chlamydia. Le groupe 1 a été traité pendant 10 jours après les deux inoculations, et le groupe 2 a été traité pendant 10 jours après la dernière inoculation, c’est-à-dire après l’infection (p.i.). Le groupe placebo (groupe 3) a reçu du diluant après les deux inoculations. Le groupe 4 a été inoculé trois fois et n’a été traité qu’après la dernière inoculation pendant 5 jours (bien que l’intention ait été de les traiter pendant 10 jours). L’autre groupe placebo (groupe 5) a été inoculé trois fois et a reçu un diluant après la dernière inoculation pendant 5 jours, similaire au groupe 4. Des échantillons ont été prélevés à 4 et 12 semaines p.i. Les schémas d’inoculation et de traitement sont également présentés sur la Fig. Le Comité de protection et d’utilisation des animaux de l’Institut national de santé publique, Helsinki, Finlande, a approuvé toutes les procédures impliquant des animaux.

Mesure des titres d’anticorps contre C. pneumoniae.

Les titres d’anticorps ont été mesurés par le test de micro-immunofluorescence (décrit à l’origine ailleurs [55]) en utilisant des corps élémentaires entiers purifiés fixés au formol de K7 comme antigène. Les anticorps anti-immunoglobulines G (IgG) ont été détectés dans le sérum en utilisant des fragments [F (ab ‘) 2 d’IgG anti-souris conjugués à l’isothiocyanate de fluorescéine; Serotec].

Culture du tissu pulmonaire.

Les lobes du poumon droit ont été homogénéisés mécaniquement dans 2 ml de tampon saccharose-phosphate-acide glutamique. Les suspensions tissulaires ont été centrifugées pour éliminer les débris, et le surnageant a été recueilli et congelé à -70 ° C. Les débris de tissu pulmonaire restants ont été stockés pour la détection de l’ADN de C. pneumoniae. Les poumons des souris ont été dosés à 4 semaines p.i. pour la présence d’organismes viables de C. pneumoniae. Toutes les analyses ont été effectuées en double exemplaire. Des cellules HL infectées avec différentes dilutions des homogénats ont été centrifugées à 490 xg pendant 1 h et incubées à 35 ° C sous 5% de C02 pendant 72 h, après quoi les plaques ont été centrifugées de nouveau comme décrit ci-dessus, de nouveaux milieux de culture ont été ajoutés et les cultures ont été cultivées pendant 72 heures supplémentaires. Finalement, les cellules ont été lavées avec une solution de PBS, fixées avec du methanol et colorées avec un anticorps monoclonal spécifique du genre Chlamydia conjugué à l’isothiocyanate de fluorescéine (Pathfinder, Sanofi Diagnostics Pasteur, Redmond, Wash.).

Détection de l’ADN de C. pneumoniae dans les tissus pulmonaires.

Des débris de tissu pulmonaire (50 mg) ont été lysés avec de la protéinase K (Qiagen) dans du tampon de lyse tissulaire (Qiagen). Après incubation à 56 ° C pendant une nuit, l’ADN a été purifié avec un kit de tissu QIAamp disponible dans le commerce, selon les instructions du fabricant (Qiagen). L’ADN purifié a été maintenu congelé à -20 ° C. Les amorces de PCR ont été synthétisées à l’Institute of Biotechnology, Helsinki, Finlande. Les séquences pour les amorces utilisées pour l’amplification de l’ADN (produit de 135 pb), l’amorce HB1 (5’-ATAGTCTCCGTAAAATCCAGCACG-3 ‘) et l’amorce biotinylée HB2 (5′-CCTGTAGGGAACCCTTCTGATC-3′) proviennent du gène C. pneumoniae omp1 . La PCR a été réalisée avec un mélange de 400 μM de désoxynucléoside triphosphate, 4,0 mM de MgCl2, 50 mM de Tris-HCl (pH 8), 100 mM de NaCl, 0,1 mM d’EDTA, 1 mM de dithiothréitol, 50% de glycérol, 1% de Triton X-100, 1,0 U de Taq polymérase (PromegaTag), 50 pmol de chaque amorce, et 10 ul d’ADN isolé à partir d’échantillons cliniques. Le volume réactionnel total était de 50 ul. Après 5 min de dénaturation à 94 ° C, les échantillons ont été soumis à 50 cycles de dénaturation (94 ° C, 30 s), hybridation (55 ° C, 30 s) et extension (72 ° C, 30 s) avec un Thermocycleur Perkin-Elmer Cetus GeneAmp 9600. Un essai d’hybridation par fluorescence à résolution temporelle avec une sonde d’hybridation marquée à l’Eu (5’-CCATATTGTACCATCAATTAA-3 ‘) (2 ng / 100 μl) a été utilisé pour tester la présence du produit de PCR spécifique de C. pneumoniae. La sonde a été incubée pendant une nuit à 37 ° C et la réaction a été arrêtée en lavant le mélange réactionnel 10 fois. Sinon, le test a été effectué comme décrit précédemment (44). La limite de détection du test de PCR est de 0,8 équivalent-génome. Tous les échantillons positifs dans la première série ont été testés deux fois, et le résultat a été considéré comme positif seulement si le résultat était le même dans les deux séries.

Détection de l’ADN de C. pneumoniae dans les tissus pulmonaires.

Des débris de tissu pulmonaire (50 mg) ont été lysés avec de la protéinase K (Qiagen) dans du tampon de lyse tissulaire (Qiagen). Après incubation à 56 ° C pendant une nuit, l’ADN a été purifié avec un kit de tissu QIAamp disponible dans le commerce, selon les instructions du fabricant (Qiagen). L’ADN purifié a été maintenu congelé à -20 ° C. Les amorces de PCR ont été synthétisées à l’Institute of Biotechnology, Helsinki, Finlande. Les séquences pour les amorces utilisées pour l’amplification de l’ADN (produit de 135 pb), l’amorce HB1 (5’-ATAGTCTCCGTAAAATCCAGCACG-3 ‘) et l’amorce biotinylée HB2 (5′-CCTGTAGGGAACCCTTCTGATC-3′) proviennent du gène C. pneumoniae omp1 . La PCR a été réalisée avec un mélange de 400 μM de désoxynucléoside triphosphate, 4,0 mM de MgCl2, 50 mM de Tris-HCl (pH 8), 100 mM de NaCl, 0,1 mM d’EDTA, 1 mM de dithiothréitol, 50% de glycérol, 1% de Triton X-100, 1,0 U de Taq polymérase (PromegaTag), 50 pmol de chaque amorce, et 10 ul d’ADN isolé à partir d’échantillons cliniques. Le volume réactionnel total était de 50 ul. Après 5 min de dénaturation à 94 ° C, les échantillons ont été soumis à 50 cycles de dénaturation (94 ° C, 30 s), hybridation (55 ° C, 30 s) et extension (72 ° C, 30 s) avec un Thermocycleur Perkin-Elmer Cetus GeneAmp 9600. Un essai d’hybridation par fluorescence à résolution temporelle avec une sonde d’hybridation marquée à l’Eu (5’-CCATATTGTACCATCAATTAA-3 ‘) (2 ng / 100 μl) a été utilisé pour tester la présence du produit de PCR spécifique de C. pneumoniae. La sonde a été incubée pendant une nuit à 37 ° C et la réaction a été arrêtée en lavant le mélange réactionnel 10 fois. Sinon, le test a été effectué comme décrit précédemment (44). La limite de détection du test de PCR est de 0,8 équivalent-génome. Tous les échantillons positifs dans la première série ont été testés deux fois, et le résultat a été considéré comme positif seulement si le résultat était le même dans les deux séries.

Statistiques.

Le test non paramétrique de Mann-Whitney U a été utilisé pour des analyses statistiques des zones d’accumulation de lipides. La positivité PCR a été testée par le test du chi carré de Pearson ou le test exact de Fisher, selon le cas, et les résultats de l’histopathologie pulmonaire ont été testés par le test du chi carré pour la tendance (SPSS pour Windows, version 10.0.5). Les valeurs exactes de P ont été rapportées comme appropriées.

RÉSULTATS

Observations cliniques.

Aucun symptôme d’infection respiratoire n’a été détecté chez les souris inoculées avec la chlamydia, et les souris dans tous les groupes ont pris du poids régulièrement tout au long de l’étude. Pour une raison inconnue, les souris inoculées trois fois et traitées seulement après la dernière inoculation ont eu une irritation cutanée et ont développé des plaies aux sites d’injection sur leur cou. L’irritation et les lésions cutanées ont été détectées principalement dans les groupes traités par télithromycine, mais elles ont également été détectées dans une certaine mesure dans les groupes placebo. Pour cette raison, le traitement de ces groupes a dû être terminé après 5 jours, après quoi les plaies cicatrisent rapidement. Par conséquent, le temps de traitement pour ces souris (groupe 4) après la dernière inoculation était de seulement 5 jours, alors qu’il était de 10 jours dans les groupes de souris (groupes 1 et 2) inoculés deux fois.

Sérologie

Toutes les souris avaient des titres d’anticorps> 128, mesurés par la méthode de micro-immunofluorescence. A 4 semaines pi, les souris inoculées deux fois et traitées après les deux inoculations avaient des titres d’anticorps significativement plus élevés (moyenne géométrique des titres par groupe d’étude, 987) que le groupe placebo (titre moyen 530) (P = 0,025, test U de Mann-Whitney) ). A 12 semaines p.i., les titres correspondants dans ces deux groupes étaient de 630 et 461, mais la différence n’était plus statistiquement significative.

Culture de C. pneumoniae et détection de l’ADN du tissu pulmonaire.

Tous les homogénats de tissu pulmonaire des échantillons prélevés à 4 semaines p.i. étaient culture négative. La méthode d’hybridation que nous avons utilisée avec la PCR a donné une valeur quantitative pour la quantité d’ADN amplifié dans le produit de PCR, mais pas directement pour la quantité d’ADN d’origine dans l’échantillon. Pour cette raison, nous avons comparé les groupes uniquement sur la base de résultats positifs et négatifs. Les valeurs positives se réfèrent donc au nombre de souris ADN-positives par groupe, exprimé en pourcentage. Les valeurs de positivité de l’ADN de C. pneumoniae à 4 et 12 semaines p.i. pour les souris recevant différents traitements sont représentés sur la Fig. Fig.2.2. Chez les souris inoculées deux fois, les taux de positivité de l’ADN diminuent significativement de 4 à 12 semaines p.i. dans les deux groupes de traitement, alors que la diminution dans le groupe traité par placebo n’était pas significative. Le traitement administré après les deux inoculations était le plus efficace, avec seulement 10% (2 sur 20) des souris restant positives pour la PCR. Chez les souris inoculées trois fois, le traitement après la dernière inoculation n’a pas significativement diminué le taux de positivité de l’ADN, et dans le groupe témoin traité par placebo, le taux de positivité a même augmenté légèrement entre 4 et 12 semaines p.i. (42 et 59%, respectivement). Le nombre d’échantillons avec des résultats discordants (échantillons positifs au premier tour d’analyse et négatifs au second tour) était de 6 sur 60 (10%) échantillons (à l’exclusion des échantillons avec des résultats négatifs) à 4 semaines p.i. et, de même, 19 échantillons sur 54 (35%) à 12 semaines p.i.

Histopathologie pulmonaire.

Aucun changement inflammatoire marqué ou sévère (grades 3 et 4, respectivement), qui sont fréquemment présents au cours de l’infection aiguë C. pneumoniae chez les souris, ont été détectés dans cette étude. Il n’y avait pas de différences significatives entre les groupes à 4 semaines p.i. (résultats non montrés), mais à 12 semaines pi, un traitement précoce par la télithromycine a nettement diminué le niveau d’inflammation dans les poumons des souris: une réaction inflammatoire modérée (grade 2) était présente chez 50% des souris non traitées, 11% des ceux traités seulement après la dernière inoculation, et 5% des souris traitées après les deux inoculations (P = 0,009, test du chi carré pour la tendance) (Tableau (Tableau 1) .1). Les traitements administrés après les trois inoculations n’ont eu aucun effet sur les réactions inflammatoires dans les poumons. Lorsque les scores d’histopathologie pulmonaire ont été comparés aux taux de positivité PCR pour les souris traitées à la télithromycine, plus de souris positives à l’ADN ont été observées chez les souris avec histologie 1 et 2 aux deux moments, et les tendances étaient statistiquement significatives (P = 0,017 à 4 semaines pi et P = 0,031 à 12 semaines pi, test du chi carré pour la tendance) (Fig. (Fig.3B) .3B). Pour les souris témoins traitées par placebo, une tendance significative a été observée seulement à 4 semaines p.i. (P = 0,043, test du chi-carré pour la tendance) (Fig. (Fig.3A3A).

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DISCUSSION

Dans cette étude, nous avons montré que le traitement par télithromycine supprime la réaction inflammatoire pulmonaire, réduit le nombre de souris positives pour l’ADN de C. pneumoniae (poumons) et affecte l’accumulation de lipides dans le sinus aortique chez les souris C57BL / 6J avec des infections chlamydiennes chroniques. est donné après chaque inoculation. Le traitement après les deux inoculations diminue significativement le taux d’ADN de C. pneumoniae chez la souris à 12 semaines pi, mais l’ADN reste détectable dans le tissu pulmonaire, malgré le traitement: à 3 mois pi, les tissus pulmonaires de 10% des souris inoculées et traitées deux fois , 28% de ceux inoculés deux fois et traités une fois après la dernière inoculation, et 60% de ceux inoculés trois fois et traités seulement après la dernière inoculation étaient PCR positifs. Les proportions de résultats discordants détectés par analyse PCR étaient de 10% à 4 semaines p.i. et 35% à 12 semaines p.i. Le pourcentage élevé d’incohérence à 12 semaines peut être en partie dû à la très faible quantité d’ADN chlamydial présent, ce qui entraîne des problèmes de sensibilité. Répétitions de toutes les analyses plus d’une fois aurait probablement donné des résultats encore plus précis.

En accord avec nos résultats, il a été démontré dans une étude précédente (5) que l’ADN chlamydial persiste pendant 2 mois dans 38% des tissus pulmonaires de souris NMRI inoculées une fois et traitées pendant 7 jours avec une combinaison d’azithromycine et de rifampine tôt après la infection. Dans une autre étude, l’ADN chlamydial est resté détectable pendant 26 semaines chez la moitié des souris déficientes en ApoE inoculées deux fois et a reçu un traitement retardé avec deux doses d’azithromycine (47). Une étude récente chez l’homme a montré que la persistance de l’ADN de C. pneumoniae dans les écouvillons nasopharyngés était corrélée à la persistance des symptômes (35). Certains patients peuvent présenter des infections persistantes et des symptômes prolongés ou des rechutes avec des résultats positifs de culture et / ou de PCR et peuvent ne pas être guéris par un traitement conventionnel pendant 7 à 21 jours (16, 26, 35, 46); même un traitement prolongé a été inefficace dans certains cas (16).

Les souris C57BL / 6J utilisées dans l’étude se sont révélées sensibles à l’infection chlamydienne, ce qui entraîne une pneumonie auto-restreinte (54, 57). Après inoculation secondaire, la plupart des chlamydiae sont éradiquées en 3 à 4 semaines chez ces souris (54), mais comme indiqué ci-dessus, la persistance de l’ADN bactérien est détectée chez certains animaux. Conformément à cela, nous n’avons trouvé aucune chlamydia viable dans le tissu pulmonaire par culture à 4 semaines p.i., et une infection réussie a été confirmée par des titres élevés d’anticorps IgG de C. pneumoniae. On s’est demandé si la présence d’ADN de Chlamydia pouvait être considérée comme un indicateur d’une infection chronique persistante. Antérieurement, l’infection persistante par C. pneumoniae, culture négative, chez la souris, démontrée en tant que PCR positive du tissu pulmonaire après l’inoculation primaire, s’est révélée être réactivée par un traitement immunosuppresseur à la cortisone (32, 33). Dans la présente étude, des souris non traitées inoculées trois fois ont montré une légère augmentation de la positivité PCR pendant 8 semaines de surveillance (entre 4 et 12 semaines p.i.), et seulement une diminution marginale a été observée dans un groupe traité par télithromycine. La persistance de la positivité PCR a été observée moins souvent chez les souris n’ayant reçu que deux inoculations. Ceci est en accord avec les résultats d’études antérieures (36), qui ont montré que la persistance de l’ADN augmente avec des inoculations répétées. L’histopathologie pulmonaire a détecté une réaction inflammatoire modérée (grade 2) chez 50 et 42% des souris dans les groupes inoculés avec C. pneumoniae deux et trois fois, respectivement, et traitées avec un placebo à 12 semaines p.i. Dans nos études préliminaires, l’inflammation de grade 2 n’a pas été observée chez des souris C57BL / 6J inoculées simulées du même âge (L. Törmäkangas, M. Leinonen et P. Saikku, données non publiées). De plus, dans les groupes traités par la télithromycine et les groupes non traités, la positivité de la PCR était nettement plus fréquente chez les souris présentant une inflammation des poumons de grade 1 et 2 que chez celles n’ayant pas d’inflammation. Ces résultats suggèrent la présence continue d’une forme chronique et non cultivable de chlamydia qui maintient l’inflammation dans le tissu pulmonaire. Des études in vitro ont montré que C. pneumoniae est capable de persister dans un état métaboliquement actif et viable dans les monocytes et macrophages humains avec un développement restreint de descendance infectieuse (2) et d’induire une infection persistante non réplicative mais viable lorsqu’elle est exposée à l’interféron gamma stimulation (4). In vivo, des macrophages alvéolaires et péritonéaux provenant de souris inoculées se sont révélés capables de transmettre l’infection à des souris non infectées (37) et C. pneumoniae est fréquemment trouvé dans les cellules mononucléaires circulantes dans des échantillons de sang périphérique humain (50). De plus, Gieffers et al. (20) et Yamaguchi et al. (56) ont récemment montré que des isolats de C. pneumoniae inoculés dans des monocytes humains circulants (20) et des lymphocytes primaires de souris (56) sont résistants à un traitement antibiotique.

Le moment du traitement semble avoir une influence sur le développement de l’infection chronique et des lésions athérosclérotiques. Dans une étude précédente, Rothstein et al. (47) ont traité des souris déficientes en ApoE qui avaient été inoculées deux fois avec une dose orale d’azithromycine à 2 et 3 semaines p.i. A l’âge de 26 semaines, c’est-à-dire 12 semaines p.i., l’infection par C. pneumoniae a augmenté la taille des lésions colorées à l’huile rouge-rouge aortique chez les souris infectées, mais l’azithromycine n’a pas réduit leur taille (47). Le retard dans le début du traitement vu dans l’étude de Rothstein et al. (47) peut avoir causé le résultat négatif. Cet effet a également été démontré dans des modèles de lapin par Muhlestein et al. (39) et Fong et al., Qui ont inoculé les lapins trois fois et les ont traités avec de l’azithromycine (17) ou de la clarithromycine (17, 19). Dans les deux dernières études (17, 19), le traitement tardif à la clarithromycine a légèrement diminué la zone de développement des lésions athéroscléreuses, alors que tous les traitements précoces dans les trois études étaient significativement efficaces pour diminuer les zones lésées.

Les souris C57BL / 6J utilisées dans l’étude se sont révélées sensibles à l’infection chlamydienne, ce qui entraîne une pneumonie auto-restreinte (54, 57). Après inoculation secondaire, la plupart des chlamydiae sont éradiquées en 3 à 4 semaines chez ces souris (54), mais comme indiqué ci-dessus, la persistance de l’ADN bactérien est détectée chez certains animaux. Conformément à cela, nous n’avons trouvé aucune chlamydia viable dans le tissu pulmonaire par culture à 4 semaines p.i., et une infection réussie a été confirmée par des titres élevés d’anticorps IgG de C. pneumoniae. On s’est demandé si la présence d’ADN de Chlamydia pouvait être considérée comme un indicateur d’une infection chronique persistante. Antérieurement, l’infection persistante par C. pneumoniae, culture négative, chez la souris, démontrée en tant que PCR positive du tissu pulmonaire après l’inoculation primaire, s’est révélée être réactivée par un traitement immunosuppresseur à la cortisone (32, 33). Dans la présente étude, des souris non traitées inoculées trois fois ont montré une légère augmentation de la positivité PCR pendant 8 semaines de surveillance (entre 4 et 12 semaines p.i.), et seulement une diminution marginale a été observée dans un groupe traité par télithromycine. La persistance de la positivité PCR a été observée moins souvent chez les souris n’ayant reçu que deux inoculations. Ceci est en accord avec les résultats d’études antérieures (36), qui ont montré que la persistance de l’ADN augmente avec des inoculations répétées. L’histopathologie pulmonaire a détecté une réaction inflammatoire modérée (grade 2) chez 50 et 42% des souris dans les groupes inoculés avec C. pneumoniae deux et trois fois, respectivement, et traitées avec un placebo à 12 semaines p.i. Dans nos études préliminaires, l’inflammation de grade 2 n’a pas été observée chez des souris C57BL / 6J inoculées simulées du même âge (L. Törmäkangas, M. Leinonen et P. Saikku, données non publiées). De plus, dans les groupes traités par la télithromycine et les groupes non traités, la positivité de la PCR était nettement plus fréquente chez les souris présentant une inflammation des poumons de grade 1 et 2 que chez celles n’ayant pas d’inflammation. Ces résultats suggèrent la présence continue d’une forme chronique et non cultivable de chlamydia qui maintient l’inflammation dans le tissu pulmonaire. Des études in vitro ont montré que C. pneumoniae est capable de persister dans un état métaboliquement actif et viable dans les monocytes et macrophages humains avec un développement restreint de descendance infectieuse (2) et d’induire une infection persistante non réplicative mais viable lorsqu’elle est exposée à l’interféron gamma stimulation (4). In vivo, des macrophages alvéolaires et péritonéaux provenant de souris inoculées se sont révélés capables de transmettre l’infection à des souris non infectées (37) et C. pneumoniae est fréquemment trouvé dans les cellules mononucléaires circulantes dans des échantillons de sang périphérique humain (50). De plus, Gieffers et al. (20) et Yamaguchi et al. (56) ont récemment montré que des isolats de C. pneumoniae inoculés dans des monocytes humains circulants (20) et des lymphocytes primaires de souris (56) sont résistants à un traitement antibiotique.

Le moment du traitement semble avoir une influence sur le développement de l’infection chronique et des lésions athérosclérotiques. Dans une étude précédente, Rothstein et al. (47) ont traité des souris déficientes en ApoE qui avaient été inoculées deux fois avec une dose orale d’azithromycine à 2 et 3 semaines p.i. A l’âge de 26 semaines, c’est-à-dire 12 semaines p.i., l’infection par C. pneumoniae a augmenté la taille des lésions colorées à l’huile rouge-rouge aortique chez les souris infectées, mais l’azithromycine n’a pas réduit leur taille (47). Le retard dans le début du traitement vu dans l’étude de Rothstein et al. (47) peut avoir causé le résultat négatif. Cet effet a également été démontré dans des modèles de lapin par Muhlestein et al. (39) et Fong et al., Qui ont inoculé les lapins trois fois et les ont traités avec de l’azithromycine (17) ou de la clarithromycine (17, 19). Dans les deux dernières études (17, 19), le traitement tardif à la clarithromycine a légèrement diminué la zone de développement des lésions athéroscléreuses, alors que tous les traitements précoces dans les trois études étaient significativement efficaces pour diminuer les zones lésées.

A notre connaissance, le modèle murin décrit ici est le premier à démontrer que le traitement antimicrobien affecte la formation de lésions lipidiques du sinus aortique chez des souris infectées par C. pneumoniae. Les résultats doivent être interprétés avec prudence en raison du large éventail de zones de lésions dans chaque groupe. Malgré la variabilité, l’effet du traitement était statistiquement significatif lorsque la télithromycine était administrée après chaque inoculation par rapport à l’effet obtenu lorsque les souris étaient traitées seulement après la deuxième inoculation dans les groupes inoculés deux fois. Cependant, aucune différence statistique n’a été observée lorsque les résultats du groupe traité deux fois ont été comparés à ceux du groupe témoin traité par placebo. Il est regrettable que le traitement des souris inoculées trois fois doive être interrompu après 5 jours en raison d’une irritation de la peau et que les effets d’un traitement de 10 jours sur l’accumulation de lipides ne puissent pas être évalués pour ce groupe. Les inconvénients de notre étude sont que nous n’étions pas en mesure d’évaluer les sinus aortique, où les lésions ont été détectées, la présence de l’antigène chlamydia, ni  nous n’avons un groupe témoin non infecté permettant de comparer les résultats pour les inoculées, les animaux non traités . Nous ne pouvons donc pas estimer l’influence directe des chlamydiaes sur le développement des lésions athéroscléreuses. Les inoculations répétées ont clairement augmenté la persistance du pathogène dans le tissu pulmonaire, et le traitement a diminué ce développement dans le groupe traité deux fois, mais des études supplémentaires avec plus de souris sont nécessaires pour vérifier les résultats d’accumulation de lipides et déterminer si les niveaux diminuent. Le modèle de souris était vraiment dû à l’effet antichlamydial de la télithromycine.

Les antibiotiques macrolides, en particulier les dérivés semi-synthétiques de l’érythromycine A (comme la clarithromycine et la roxithromycine), possèdent plusieurs propriétés anti-inflammatoires (28, 30, 48). Structurellement, la télithromycine est dérivée de l’érythromycine A (14), mais il n’y a pas de rapports sur les effets anti-inflammatoires potentiels de la télithromycine. Dans notre étude, certaines souris se sont révélées positives à la PCR même lorsqu’aucune inflammation n’a été détectée dans le tissu pulmonaire des groupes traités par télithromycine, alors qu’aucun ADN chlamydial n’a été détecté dans le tissu pulmonaire des souris non traitées sans inflammation. Cela peut être dû à un effet anti-inflammatoire de la télithromycine. Nous ne pouvons pas exclure la possibilité que l’accumulation réduite de lipides dans les groupes de traitement soit également due à l’effet anti-inflammatoire, bien que le traitement ait intensifié la réponse de l’anticorps IgG à C. pneumoniae. Fong et al. (19) ont suggéré que l’action anti-inflammatoire de la clarithromycine n’était pas très marquée chez les lapins, car chez les lapins nourris au cholestérol non infectés, la diminution du développement des lésions athéroscléreuses observées après le traitement à la clarithromycine était mineure comparée à celle observée chez les chlamydia-inoculés. lapins.

Le fait que seul un traitement administré tôt après l’infection semble efficace pour prévenir le développement d’une infection chronique et réduire l’athérosclérose accélérée par l’infection dans des modèles animaux devrait être pris en compte lors de futurs essais de traitement chez l’homme. Comme la plupart des agents antimicrobiens utilisés pour traiter les infections à Chlamydia affectent seulement les bactéries qui se répliquent, leur potentiel à guérir les infections chroniques peut être modeste.

En conclusion, nos données suggèrent que la télithromycine a le potentiel d’affecter le développement de l’infection chronique à C. pneumoniae dans un modèle de souris et que le traitement par télithromycine peut avoir un effet sur la diminution des changements athérosclérotiques chez ces souris. Ces effets ont été observés uniquement dans les groupes dans lesquels le traitement a été administré après chaque inoculation, mais certaines souris dans ces groupes sont restées positives à l’ADN. Sur la base des résultats actuels et des résultats obtenus avec d’autres modèles animaux, nous émettons l’hypothèse que les traitements antimicrobiens conventionnels ne sont pas efficaces pour éradiquer totalement les chlamydia chroniques et persistantes et que les effets des schémas thérapeutiques plus longs et / ou des combinaisons d’antibiotiques différents être étudié plus avant.

Source et références

Cette étude a été financée par Aventis Pharma, Paris, France.

https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pmc/articles/PMC521883/

Effet de l’azithromycine plus la rifampicine par rapport à l’amoxicilline seule sur l’éradication et l’inflammation dans l’évolution chronique de la pneumonie à Chlamydia pneumoniae chez la souris.

Les effets du traitement par l’azithromycine et la rifampicine (A + R), l’amoxicilline (A) ou le placebo (P) sur l’évolution chronique de la pneumonie expérimentale à Chlamydia pneumoniae chez la souris ont été évalués par culture, PCR et immunocytochimie. inflammation dans le tissu pulmonaire. L’éradication de l’agent pathogène était significativement plus fréquente et l’inflammation dans les tissus était significativement réduite après traitement par A + R comparé à après traitement par A ou P. Le traitement combiné avec azithromycine et rifampicine a montré des effets favorables dans l’évolution chronique de la pneumonie C. pneumoniae.

https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/10817751

https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/10348778

Effets de deux régimes antibiotiques sur le cours et la persistance expérimentale de la pneumonie TWAR Chlamydia pneumoniae.

Nous avons étudié les effets de deux régimes antibiotiques sur l’évolution de l’infection à Chlamydia pneumoniae dans les poumons de souris Swiss Webster. Après une provocation intranasale avec des isolats AR-388 (1,3 x 10 (7) unités formant une inclusion par souris) et AR-39 (1,5 x 10 (6) unités formant une inclusion par souris), des groupes d’animaux ont été traités avec de la doxycycline ( 10 mg / kg de poids corporel une fois par jour pendant 3 jours), l’azithromycine (10 mg / kg [dose unique]) ou une solution saline. Les réponses ont été évaluées par l’isolement des organismes en culture cellulaire, la détection de l’ADN de TWAR dans les tissus pulmonaires par PCR et l’histologie pulmonaire. Les deux schémas thérapeutiques ont été efficaces pour éliminer les infections induites par l’AR-388 (p = 0,02 et 0,007 pour la doxycycline et l’azithromycine, respectivement) par rapport aux témoins. L’ADN de TWAR a été détecté dans 77 et 25% des poumons négatifs pour la culture deux semaines après le traitement des infections AR-388 et AR-39, respectivement. Les changements histologiques ont montré une pneumonie interstitielle et étaient similaires dans le temps pour tous les groupes. L’azithromycine à dose unique a produit des concentrations de médicament dans les tissus pulmonaires supérieurs aux CMI pour les souches étudiées pendant une période trois fois plus longue que celle de la doxycycline à dose unique. Nous avons conclu que les régimes antibiotiques à court terme ont été couronnés de succès dans le traitement de la pneumonie à TWAR expérimentale chez la souris. L’ADN de TWAR a été fréquemment récupéré des tissus pulmonaires après un traitement apparemment réussi.

Source

https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/7695327

 

Compléments d’informations sur les antibiotiques et les co infections « Chlamydias, Rickettsia, Bartonnella »

Démonstration intéressante sur la pénétration des antibiotiques en fonction du PH  précise l’utilité de la Rifampicine ou du plaquenil dans une thérapie par antibiotique ou en cas d’antibio résistance à la doxy ou aux macrolides.

http://www.infectiologie.com/UserFiles/File/formation/du/grenoble/dutai-grenoble-2016-17-anti-intracellulaires-cdentan.pdf

 

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